01
背景
类风湿性关节炎(RA)是一种自身免疫性疾病，可导致身体关节的慢性炎症，对RA的控制不足可能会导致严重的关节损伤，最终导致残疾。RA可通过地塞米松(Dex)治疗，但是，长期使用和高剂量的Dex可能会产生严重的副作用，包括骨质疏松、高血压、肌肉萎缩和高血糖。因此，开发纳米尺度的药物载体以减少非靶向性副作用。脂质体是一种小的磷脂囊泡，由脂质双层膜包裹在离散的水核中，是一种著名的纳米级药物载体，可以降低药物的毒性。作为药物载体，脂质体具有生物相容性、可包封亲脂性和亲水性药物、尺寸和理化性质可调等优点。但由磷脂双膜组成的传统脂质体在治疗应用上仍面临两个主要障碍。首先，传统脂质体的血液循环时间有限，因为它们可以被肝脏的网状内皮系统(RES)迅速吸收。第二，传统的脂质体在生理条件下往往缺乏长期稳定性，脂质体的不稳定性可能是由渗透破裂、脂水解和表面活性剂诱导的崩解引起的。虽然结合这两种方法设计聚合物隐身脂质体的报道不多，但它们作为药物载体在体内的应用仍然有限。我们的聚合隐身脂质体由1,2-双(10,12-tricosadiynoyl)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DC8,9PC)组成和1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸-聚乙二醇(DSPE-PEG)通过薄膜水化方法制备。其中，DC8,9PC分子在紫外光照射下通过双分子层交联以提高脂质体的结构完整性，PEG链提供了一层隐身层以提高其在血管中的血液循环时间。02
制备与合成
DC8,9PC和DSP-PEG的化学结构分别如图1a和b所示。PEG有一个聚乙二醇链，共价连接到一个二硬脂酰脂尾。在我们的实验中，采用薄膜水化方法，在DC8,9PC和DSP-PEG的不同混合摩尔比下(图1c)，通过UV照射形成聚合的隐身脂质体(图1d)。合成的DC8,9PC/DSPE-PEG脂质体溶液在紫外线照射前呈白色，照射后呈橙色表明DC8,9PC在脂质体的双分子层中发生交联。
03
表征
随着DSP-PEG摩尔分数的增加，聚合后的隐身脂质体溶液的橙色变浅(图2a)，这是由于双分子层中DC8,9PC交联密度的降低。聚合的隐身脂质体10mol%的DSP-PEG有一个单一的吸热峰，相变温度为47℃(图2b)，表明在聚合的隐身脂质体双层中，DC8,9PC和DSP-PEG组分混合良好。当DSP-PEG在50mol%以上时，聚合后的隐身脂质体呈现出两个独立的吸热峰(图2b)，表明双分子层内DC8,9PC和DSP-PEG组分发生了相分离。此外，聚合的隐形脂质体的水动力尺寸和多分散性指数值随着DSP-PEGmol%的增加而增加(图2c)。
使用聚合的隐形脂质体与10mol%的DSP-PEG作为药物载体治疗RA。加入10mol%的DSP-PEG后，隐身脂质体的水动力尺寸略有减小，但它们的表面电荷几乎保持不变(图3a)。TEM图像显示，隐形脂质体在紫外光聚合后保持球形(图3b)。聚合后的隐身脂质体对Dex的包封率和负载率明显高于非聚合后的隐身脂质体(图3a)。紫外照射提高Dex溶液的温度，可增加右美托咪定在水溶液中的溶解度。DC8,9PC的光聚合作用导致脂质体双分子层中形成小孔隙。溶解的Dex分子就被溶解了。紫外光照射穿透聚合后的隐身脂质体的小孔，从而提高包封率和载药量。
30min孵育引起非聚合隐形脂质体的水动力尺寸显著增加(图3d)，表明TritonX-破坏了非聚合隐形脂质体。相反，在20mMTritonX-孵育30min后，聚合隐形脂质体的水动力尺寸仅略有增加(图3d)。在37℃与大鼠血清孵育4h后，我们发现不到5%的Dex从聚合隐形脂质体中漏出，但几乎60%的Dex从非聚合隐形脂质体中漏出(图3e)。结果表明，与非聚合隐形脂质体相比，聚合隐形脂质体对TritonX-和血清脂蛋白的破坏具有更高的抗性，这将有利于RA的靶向治疗。显示了在37℃PBS溶液中聚合和非聚合隐形脂质体对Dex的释放谱。
研究了Dex与PBS和游离Dex聚合隐形脂质体的治疗效果。图6(a)显示关节炎诱导和治疗方案的时间表，显示联合得分-时间曲线。用PBS治疗的关节炎大鼠显示随着时间的推移，关节评分增加，各组关节炎大鼠的爪子厚度结果与关节评分的观察一致(图6c)。用Dex聚合隐形脂质体处理的关节炎大鼠爪厚度最低。用Dex聚合隐形脂质体的治疗活性增强可归因于其循环时间长、对炎症关节的优先靶向性和高的生物利用度。如图6d-g所示，在血清和关节组织中，6d-g、PBS处理可显著提高TNF-a和IL-1b的水平，而用Dex处理游离Dex和聚合隐形脂质体可降低血清和关节组织中TNF-a和IL-1b的水平。
此外，我们还通过检查软骨侵蚀和细胞浸润，用苏木精-伊红染色分析了踝关节的组织学病理，这是RA的典型特征。如图7a所示幼稚大鼠软骨厚，无细胞浸润。与幼稚大鼠相比，PBS处理的大鼠有大量的细胞浸润和严重的软骨侵蚀（图7d）。虽然游离Dex治疗能够改善关节软骨，因为Dex的抗炎作用，但仍观察到密集的细胞浸润（图7c）。相反，用Dex聚合隐形脂质体治疗的大鼠表现出无形的软骨侵蚀和有限的细胞浸润（图7d）。踝关节软骨厚度与幼稚大鼠相当。为了进一步表征不同治疗方法之间的差异，我们以盲目的方式进行了软骨侵蚀和细胞浸润的组织学评分。组织学评分按细胞浸润和软骨侵蚀从0分到3分进行分级。用Dex聚合隐形脂质体处理的大鼠关节软骨侵蚀和细胞浸润（分级低于1），显然，用Dex治疗聚合隐形脂质体能够减轻RA的进展。
04
结论
通过薄膜水化法制备DC8,9PC和DSPE-PEG组成的聚合隐形脂质体，然后进行UV照射，成功地形成Dex治疗RA的抗炎疗效。我们证明了聚合隐形脂质体是高度稳定的，并且显示出较长的血液循环时间。它们具有生物相容性，特别是在炎症条件下，可以被细胞内化。在注射到关节炎大鼠后，聚合隐形脂质体能够优先在炎症关节中积累。加Dex的聚合隐形脂质体的治疗充分抑制了关节组织中促炎细胞因子(TNF-a和IL-1b)的水平，减少了炎症关节的肿胀，减轻了RA的进展。Dex的良好治疗活性可归因于高稳定性、长的血液循环时间和聚合隐形脂质体在炎症关节的优先靶向性。
原文：Improvingtheanti-inflammatoryeffiffifficacyofdexamethasoneinthetreatmentofrheumatoidarthritiswithpolymerizedstealthliposomesasadeliveryvehicle
DOI:10./c9tbc
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